Monkeypox Virus Real Time PCR කට්ටලය
නිෂ්පාදන විස්තර
අපේක්ෂිත භාවිතය
එය තත්‍ය කාලීන PCR පද්ධති භාවිතයෙන් මිනිස් සෙරුමය හෝ තුවාල පිටකිරීමේ සාම්පල වල Monkeypox වෛරසය හඳුනා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරයි.
පරීක්ෂණ මූලධර්මය
මෙම නිෂ්පාදනය ප්රතිදීප්ත ගවේෂණ පදනම් වූ Taqman® තත්‍ය කාලීන PCR විශ්ලේෂණ පද්ධතියකි.Monkeypox වෛරසයේ F3L ජානය හඳුනාගැනීම සඳහා විශේෂිත ප්‍රයිමර් සහ පරීක්ෂණ නිර්මාණය කර ඇත.මානව සංරක්‍ෂිත ජානය ඉලක්ක කරගත් අභ්යන්තර පාලනය ව්‍යාජ ඍණාත්මක ප්රතිඵල වළක්වා ගැනීම සඳහා නියැදි එකතු කිරීම, නියැදි හැසිරවීම සහ තත්‍ය කාලීන PCR ක්‍රියාවලිය නිරීක්ෂණය කරයි.කට්ටලය සම්පුර්ණයෙන්ම premix lyophilized පද්ධතියක් වන අතර, Monkeypox Virus හඳුනාගැනීම සඳහා අවශ්‍ය ද්‍රව්‍ය ඇතුළත් වේ: න්යෂ්ටික අම්ල වර්ධක එන්සයිමය, UDG එන්සයිමය, ප්‍රතික්‍රියා බෆරය, විශේෂිත ප්‍රයිමර් සහ පරීක්ෂණය.
ප්රධාන අන්තර්ගතය
සපයන ලද සංරචක වගුවේ දක්වා ඇත.
| සංරචක | පැකේජය | අමුද්රව්යය |
| වඳුරු වයිරසයLyophilized Premix | 8 තීරු PCR නල× 6 මලු | ප්‍රයිමර්, ප්‍රොබ්ස්, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA පොලිමරේස්, UDG එන්සයිම |
| MPV ධනාත්මක පාලනය | 400 μL × 1 නලයක් | ඉලක්ක ජාන අඩංගු DNA අනුපිළිවෙල |
| MPV සෘණ පාලනය | 400 μL × 1 නලයක් | මානව ජාන ඛණ්ඩය අඩංගු DNA අනුපිළිවෙල |
| ද්රාවණය විසඳුම | 1 mL × 1 නල | ස්ථායීකාරකය |
| අනුකූලතා සහතිකය | 1 කෑල්ලක් | / |
මෙහෙයුම් ප්රවාහය
1. නියැදියඑකතු:නියැදිය අනුකූලව වඳ නල වලට එකතු කළ යුතුය
සම්මත තාක්ෂණික පිරිවිතර සමඟ.
2. ප්‍රතික්‍රියාකාරක සකස් කිරීම (ප්‍රතික්‍රියාකාරක සකස් කිරීමේ ප්‍රදේශය)
කට්ටලයේ සංරචක පිටතට ගන්න, ස්ථාවර භාවිතය සඳහා කාමර උෂ්ණත්වයේ දී ඒවා සමතුලිත කරන්න.
3. ආදර්ශ සැකසුම් (ආදර්ශ සැකසුම් ප්‍රදේශය)
3.1 න්යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණය
වෛරස් DNA නිස්සාරණ කට්ටලවල අනුරූප අවශ්‍යතා සහ ක්‍රියා පටිපාටි අනුව, න්යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණය සඳහා 200μL දියර සාම්පල, ධනාත්මක පාලනය සහ සෘණ පාලනය ලබා ගැනීම නිර්දේශ කෙරේ.
3.2 Lyophilized කුඩු ද්රාවණය සහ සැකිලි එකතු කිරීම
සාම්පල ගණන අනුව Monkeypox Virus Lyophilized premix සකස් කරන්න.එක් සාම්පලයකට Lyophilized premix කුඩු අඩංගු PCR නලයක් අවශ්‍ය වේ.සෘණ පාලනය සහ ධනාත්මක පාලනය සාම්පල දෙකක් ලෙස සැලකිය යුතුය.
(1) Lyophilized premix අඩංගු සෑම PCR නලයකටම 15μL ද්‍රාවණ ද්රාවණය එක් කරන්න, ඉන්පසු එක් එක් PCR නලයට පිළිවෙළින් 5μL නිස්සාරණය කරන ලද සාම්පල/ සෘණ පාලනය/ධනාත්මක පාලනය එක් කරන්න.
(2) PCR ටියුබ් තදින් ආවරණය කරන්න, lyophilized කුඩු සම්පූර්ණයෙන්ම දිය වී මිශ්‍ර වන තුරු PCR ටියුබ් අතින් ෆ්ලික් කරන්න, ක්ෂණික අඩු-වේග කේන්ද්‍රාපසාරී කිරීම මගින් PCR ටියුබ්වල පතුලට දියර එකතු කරන්න.
(3) හඳුනා ගැනීම සඳහා පොදු තත්‍ය කාලීන PCR උපකරණයක් භාවිතා කරන්නේ නම්, PCR නල විස්තාරණ ප්‍රදේශයට කෙලින්ම මාරු කරන්න;හඳුනාගැනීම සඳහා BTK-8 භාවිතා කරන්නේ නම්, පහත සඳහන් මෙහෙයුම් සිදු කිරීම අවශ්‍ය වේ: PCR නලයේ සිට BTK-8 හි ප්‍රතික්‍රියා චිප ළිඳට 10 μL දියර මාරු කරන්න.එක් PCR නලයක් චිපයේ එක් ළිඳකට අනුරූප වේ.පයිප්ප තැබීමේ ක්‍රියාවලියේදී, පයිප්පයේ සිරස් අංශක 90 ක් ඇති බවට වග බලා ගන්න.aerosol barrier pipette ඉඟි මධ්‍යස්ථ බලයෙන් ළිඳේ මධ්‍යයේ තැබිය යුතු අතර පළමු ආම්පන්නයට ළඟා වූ විට (බුබුලු වළක්වා ගැනීමට) පයිප්පය තල්ලු කිරීම නැවැත්විය යුතුය.ළිං පිරවීමෙන් පසු, සියලුම ළිං ආවරණය වන පරිදි ප්‍රතික්‍රියා චිප පටලයක් පිටතට ගෙන චිපය විස්තාරණ හඳුනාගැනීමේ ප්‍රදේශයට මාරු කරනු ලැබේ.
4. PCR විස්තාරණය (හඳුනාගැනීමේ ප්‍රදේශය)
4.1 PCR ටියුබ්/ප්‍රතික්‍රියා චිපය ප්‍රතික්‍රියා ටැංකියට දමා එක් එක් ප්‍රතික්‍රියාවේ නම් හොඳින් අනුරූප අනුපිළිවෙලට සකසන්න.
4.2 හඳුනාගැනීමේ ප්රතිදීප්ත සැකසුම්: (1) Monkeypox වෛරසය (FAM);(2) අභ්යන්තර පාලනය (CY5).
4.3 පහත පාපැදි ප්‍රොටෝකෝලය ක්‍රියාත්මක කරන්න
ABI7500 හි ප්‍රොටෝකෝලය, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | සයිකල් | |
| 1 | පූර්ව නිරෝධනය | 95℃ | විනාඩි 2 | 1 |
| 2 | Denaturation | 95℃ | තත්පර 10 යි | 45 |
| Annealing, extension, fluorescence අත්පත් කර ගැනීම | 60℃ | තත්පර 30 යි | ||
BTK-8 හි ප්‍රොටෝකෝලය:
| පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | සයිකල් | |
| 1 | පූර්ව නිරෝධනය | 95℃ | විනාඩි 2 | 1 |
| 2 | Denaturation | 95℃ | තත්පර 5 යි | 45 |
| Annealing, extension, fluorescence අත්පත් කර ගැනීම | 60℃ | තත්පර 14 යි | ||
5. ප්රතිඵල විශ්ලේෂණය (කරුණාකර උපකරණ පරිශීලක අත්පොත බලන්න)
ප්රතික්රියාවෙන් පසුව, ප්රතිඵල ස්වයංක්රීයව සුරැකෙනු ඇත.විශ්ලේෂණය කිරීමට "විශ්ලේෂණය" ක්ලික් කරන්න, සහ උපකරණය ප්රතිඵල තීරුවේ එක් එක් නියැදියක Ct අගයන් ස්වයංක්රීයව අර්ථ නිරූපණය කරයි.සෘණ සහ ධනාත්මක පාලන ප්රතිඵල පහත දැක්වෙන "6. තත්ත්ව පාලනයට" අනුකූල විය යුතුය.
6. තත්ත්ව පාලනය
6.1 සෘණ පාලනය: FAM නාලිකාවේ Ct හෝ Ct>40 නැත, සාමාන්‍ය විස්තාරණ වක්‍රය සහිත CY5 නාලිකාවේ Ct≤40.
6.2 ධනාත්මක පාලනය: සාමාන්‍ය විස්තාරණ වක්‍රය සහිත FAM නාලිකාවේ Ct≤35, සාමාන්‍ය විස්තාරණ වක්‍රය සහිත CY5 නාලිකාවේ Ct≤40.
6.3 ඉහත සියලු නිර්ණායක සපුරා ඇත්නම් ප්රතිඵලය වලංගු වේ.එසේ නොමැති නම්, ප්රතිඵලය වලංගු නොවේ.
ප්රතිඵල අර්ථ නිරූපණය
පහත සඳහන් ප්රතිඵල හැකි ය:
| FAM නාලිකාවේ Ct අගය | CY5 නාලිකාවේ Ct අගය | අර්ථ දැක්වීම | |
| 1# | Ct හෝ Ct>40 නැත | ≤40 | වඳුරු වයිරසය සෘණ |
| 2# | ≤40 | ඕනෑම ප්රතිඵල | වඳුරු පොක්ස් වෛරසය ධනාත්මකයි |
| 3# | 40-45 | ≤40 | නැවත පරීක්ෂා කිරීම;එය තවමත් 40~45 නම්, 1# ලෙස වාර්තා කරන්න |
| 4# | Ct හෝ Ct>40 නැත | Ct හෝ Ct>40 නැත | වලංගු නැත |
සටහන: අවලංගු ප්‍රතිඵලයක් සිදුවුවහොත්, නියැදිය එකතු කර නැවත පරීක්ෂා කිරීමට අවශ්‍ය වේ.
ඇණවුම් තොරතුරු
| නිෂ්පාදන නාමය | බළලානැත | ප්රමාණය | නියැදිය | රාක්ක ආයු කාලය | Trans.සහ ස්ටෝ.උෂ්ණත්වය |
| Monkeypox Virus Real Time PCR කට්ටලය | B001P-01 | පරීක්ෂණ / කට්ටලය 48 ක් | සෙරුමය / තුවාල පිටවීම | මාස 12 | -25-15℃ |
